1 Einleitung 11

2 Material und Methoden 17

2.1 Material 17

2.1.1 Untersuchte Pilzstämme 17

2.1.2 Chemikalien, Reagenzien und Pufferlösungen 26

2.1.2.1 Chemikalien und Reagenzien 26

2.1.2.2 Enzyme und Kitsysteme 27

2.1.2.3 Puffer und Lösungen 28

2.1.3 Nährmedien 30

2.1.3.1 Nährmedien zur Anzucht von Pilzen 30

2.1.3.2 Nährmedien zur Anzucht von Bakterien 31

2.2 Methoden 31

2.2.1 Kultivierung der Mycelien 31

2.2.2 Giemsa-Kernfärbung 32

2.2.3 Rasterelektronenmikroskopie (REM) 32

2.2.4 Isolierung von DNA 33

2.2.5 DNA-Amplifizierung mittels Polymerasekettenreaktion (PCR) 34

2.2.5.1 Verwendeter Genomabschnitt und Primersequenzen 34

2.2.5.2 Der PCR-Reaktionsansatz 35

2.2.6 Reinigung der PCR-Produkte 36

2.2.6.1 Reinigung der PCR-Produkte für nachbolgende
Restriktionsfragment-Analysen 36

2.2.6.2 Reinigung der PCR-Produkte für nachfolgende Sequenzierung
oder Klonierung 36

2.2.7 Restriktionsfragmentanalyse der amplifizierten rDNA-Abschnitte 36

2.2.7.1 Auswahl der Arten 38

2.2.7.2 Auswertung der Restriktionsdaten 38

2.2.8 Sequenzanalyse 38

2.2.8.1 Direct Blotting 39

2.2.8.1.1 Cycle Sequencing mit Biotin-markierten Primern 39

2.2.8.1.2 Gellauf 39

2.2.8.1.3 Membranentwicklung 39

2.2.8.2 Automated Sequencing 40

2.2.8.2.1 Cycle Sequencing mit Fluoreszenz-markierten Nukleotiden 40

2.2.8.2.2 Reinigung der Cycle Sequencing-Ansätze 40

2.2.8.2.3 Gellauf 40

2.2.9 Auswertung der Sequenzdaten 41

2.2.9.1 Additive Verrechnung der Daten mittels Neighborjoining 41

2.2.9.2 Parsimonische Analyse mittels PAUP (Phylogenetic Analysis
Using Parsimony) 42

2.2.10 Klonierung von PCR-Fragmenten 42

2.2.10.1 Ligation 42

2.2.10.2 Transformation 43

2.2.10.2.1 Herstellung transformationskompetenter Bakterien 43

2.2.10.2.2 Transformation von Bakterien 44

2.2.10.3 Screening der TransLormanten 44

2.2.10.4 Isolierung von Plasmid-DNA 44

2.2.10.5 Sequenzierung der Plasmid-DNA 44

3 Ergebnisse 47

3.1 Beobachtungen und Untersuchungen an Mycelkulturen und
Fruchtkörpern 47

3.1.1 Mycelwachstum 47

3.1.2 Karyologische Untersuchungen 47

3.2 Molekularbiologische Untersuchungen 49

3.2.1 Isolierung und Amplifizierung von DNA 49

3.2.1.1 Isolierung und Amplif~zierung von DNA aus Mycolkulturen und
Frischmaterial 49

3.2.1.2 Isolierung und Amplifizierung von DNA aus lyophilisierten und
herbarisierten Fruchtkörpern 49

3.2.2 Auswahl geeigneter rDNA-Abschnitte zur Klärung systematischer
Fragestellungen mittels Restriktionsfragmentanalyse 50

3.2.2.1 Resultierende RFLP-Phänotypen 50

3.2.2.2 Auswertung der Restriktionsfragmentdaten 52

3.2.3 SequenZanalyse 52

3.2.3.1 Sequenzanalyse des 28S Gens 52

3.2.3.2 Sequenzanalyse der Internal Transcribed Spacer-Region (ITS) 53

3.2.4 Klonierung von PCR-Produkten 54

3.2.5 Phylogenetische Auswertung der Sequenzdaten 55

3.2.5.1 Untergliederung der Ordnung Boletales 55

3.2.5.2 Verwandtschaftliche Gliederung innerhalb de? Unterordnungen
Coniophorineae, Paxillineae und Suillineae 58

4 Diskussion 65

4.1 Phylogenetische Gliederung der Boletales 65

4.1.1 Verschiedene Fruchtkörpertypen innerhalb der Boletales 66

4.1.2 Pigmentmerkmale 69

4.2 Phylogenetische Beziehungen innerhalb der Coniophorineae,
Paxillinese und Suillinese 72

4.2.1 Coniophorineae 73

4.2.1.1 Familien- und Gattungskonzepte innerhalb der Coniophorineae 73

4.2.1.1.1 Coniophoraceae, Hygrophoropsidaceae und Tapinellaceae 75

4.2.1.1.1.1 Conlophora 77

4.2.1.1.1.2 Hygrophoropsis 80

4.2.1.1.1.3 Leucogyrophana (excl. L. pinastri) 81

4.2.1.1.1.4 Tapinella 85

4.2.1.1.2 Serpulaccae fam. nov 88

4.2.1.1.2.1 Austropaxillus 92

4.2.1.1.2.2 Gymnopaxillus 93

4.2.1.1.2.3 SerTula 94

4.2.1.1.2.4 Pseudomerulius 95

4.2.1.2 Progressionstendenzen innerhalb der Coniophorineae 95

4.2.2 Paxillineae 98

4.2.2.1 Familien- und Gattungskonzepte innerhalb der Paxillineae 98

4.2.2.1.1 Melanogastraceae 99

4.2.2.1.1.1 Alpova 100

4.2.2.1.1.2 Melanogaster 101

4.2.2.1.2 Gyrodontaccae 103

4.2.2.1.2.1 Gyrodon 103

4.2.2.1.2.2 Hydnomeralins 104

4.2.2.1.3 Paxillaceae 105

4.2.2.1.3.1 Paxillus s. str 106

4.2.2.2 Progressionstendenzen innerhalb der Paxillineae 113

4.2.3 Suillineae 114

4.2.3.1 Familien- und Gattungskonzepte innerhalb der Suillineae 1 16

4.2.3.1.1 SuillacCae 1 16

4.2.3.1.1.1 Suillus 1 17

4.2.3.1.1.2 Boletinus 123

4.2.3.1.2 Gomphidiaceae 124

4.2.3.1.2.1 Chroogomphus 126

4.2.3.1.2.2 Gomphidins 127

4.2.3.1.3 Rhizopogonaceae und Truncocolumellaceae 129

4.2.3.1.3.1 Truncocolumella 130

4.2.3.1.3.2 Rhizopogon 131

4.2.3.1.3.3 Alpova 134

4.2.3.2 Progressionstendenzen innerhalb der Suillineae 134

5 ZUSAMMENFASSUNG 139

6 SUMMARY 143

7 LITERATURVERZEICHNIS 147